关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知
国家卫生和计划生育委员会办公厅
关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知
卫办医政函〔2013〕402号
各省、自治区、直辖市卫生厅局（卫生计生委），新疆生产建设兵团卫生局：
根据人感染H7N9禽流感疫情联防联控工作机制会议议定事项及《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号，以下简称《通知》）精神，为指导医院做好人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作，我委组织制定了《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》（附件1），并委托中国疾控中心制定了《人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求》（附件2）等技术规范。现转发给你们（可从国家卫生和计划生育委员会网站医政管理栏目中下载），供医院在开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。
各省级卫生（卫生计生）行政部门要按照《通知》有关要求，组建省级疾控机构实验室和省级临床检验专家共同组成的专家组，对医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作提供技术指导和支持，负责医院实验室核酸检测质量控制工作。要组织本辖区人感染H7N9禽流感病毒核酸检测定点医院检验人员进行培训，认真学习掌握相关要求，提高检验人员技术能力和水平。医院开展病毒核酸检测时，应当按照技术规范有关要求，规范开展检测工作，重视实验室质量控制，保障实验室生物安全，做好检验人员职业防护，保证检测结果科学、可靠。
附件：1.医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序.docx
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书.docx
国家卫生和计划生育委员会办公厅
2013年5月16日
医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序
一、目的
确保人感染H7N9禽流感病毒核酸检测过程标准化、规范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。
二、适用范围
医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号）和《关于做好医疗机构人感染H7N9禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔2013〕29号）有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作。
三、样本采集、运送和保存
尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。患者有下呼吸道样本时，应优先采集。
根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序（SOP），并组织样本采集人员进行培训及考核。样本的采集应当严格按照SOP进行。
样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。若气温高时，需放入冰块降温。样本抵达实验室后，应尽快进行检测，24小时内能检测的样本可置于2～8℃暂时保存，24小时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。样本避免反复冻融。
样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒RNA降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。
四、PCR检测
（一）样本处理
样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。
（二）试剂准备
试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪器。分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。
（三）加样
加样应当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。
按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。
（四）PCR扩增检测
PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。
（五）结果分析
根据所用试剂盒说明书设置基线值（baseline）。荧光阈值（threshold）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数（或显示为undet）。使用仪器配套软件自动分析结果。
（六）质量控制
检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本（多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效），随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。
试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。
（七）实验结果的判定与解释。
按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。
五、检测结果报告
按照试剂盒说明书进行。
六、其它注意事项
（一）人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采取生物安全防护措施（使用眼罩、N95型口罩等）。样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜内进行。实验室应具有良好的通风。
（二）注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。
（三）实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。实验后应及时清洁工作台，以防污染。
（四）每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。
（五）使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明书（见附件1、2）有关要求。
附件：1.H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书
H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
【产品名称】
通用名称：H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）
英文名称：Diagnostic Kit for H7N9 subtype avian flu virus RNA（Fluorescence PCR）
【包装规格】48人份/盒。
【预期用途】
本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对H7N9亚型禽流感病毒的HA基因和NA基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。
【主要组成成分】
名称 成分 规格 数量(管)
H7反应液 含内标RNP 、H7亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
N9反应液 含内标RNP 、N9亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
DNA聚合酶 DNA聚合酶，不可用其他同类DNA聚合酶替代 60μl /管 1
逆转录酶 逆转录酶，不可用其他同类逆转录酶替代 60μl /管 1
阳性对照 RNP、H7、N9 RNA假病毒混合物 1.0ml/管 1
阴性对照 DEPC水 1.0ml/管 1
本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。
本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：
生物安全柜、台式离心机、旋涡震荡器、拭子、采样管、无菌病毒采样液、1.5 ml无核酸酶的离心管、全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法，北京金豪制药股份有限公司，Cat：BJH101)。
【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期2个月，阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。
【样本要求】
1. 样本类型：咽拭子。推荐使用金豪公司生产的微生物采样及运送管（12人份/盒）。
2. 拭子、采样管和保存液：
2.1拭子选择：应使用头部为合成纤维（例如，聚酯纤维），杆部为铝或塑料的拭子。
2.2采样管：外螺旋口、耐-70℃冻存，可容纳3 ml病毒采样液。
2.3无菌病毒采样液：应含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生产的抗生素，缓冲液，经无菌处理。
3.样本采集、运输和保存：
由于H7N9亚型禽流感病毒为呼吸道传播病毒，有关生物安全应按照“《人间传染的病原微生物名录》”中高致病性禽流感病毒进行管理。
3.1采集：采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测。用微生物采样及运送管内的采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。4℃暂存并在48小时内送达实验室。
3.2保存和运输：新鲜采集样本应在4℃条件下48小时运送到检测实验室。保存样本可在-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。冷冻样本应在冷冻条件下送至实验室。运输时在包装箱内填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。
样本送至实验室后，立即进行处理和分装，避免反复冻融。临床样本保存在4℃不能超过4天。
4.咽拭子标本的处理
咽拭子要在标本保存液中充分搅动（至少 40 下），以洗脱拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次（防止多次冻融），使细胞破裂，释放病毒颗粒。然后在4℃条件下，10000rpm离心20分钟，用上清接种细胞或直接提取RNA。如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。
【检验方法】
1. 核酸提取：
取200μl咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法)，该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。
本品的阳性对照和阴性对照均参与核酸提取。
1.1. 准备及注意事项：
1.1.1 分别在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml无水乙醇，颠倒充分混匀，并在瓶身上加以标识。
1.1.2 吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预热。
1.1.3 冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。
1.1.4 区分操作中的离心设置（rpm和g），本产品操作过程均为室温离心。
1.1.5 助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。
1.2. 样本裂解及核酸吸附
1.2.1 在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液，加入200μl待处理样本，剧烈震荡2分钟，室温静置10分钟。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无水乙醇体积。体积大于400μl样本应分多次进行处理。
1.2.2 加入480μl无水乙醇，颠倒混匀，吸取600μl裂解混合物转移到核酸吸附柱中。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变乙醇用量。
1.2.3 3500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱，重新离心一次，弃套管中的液体。
1.2.4 将核酸吸附柱重新装入套管，6000g离心1分钟，倒掉套管中的液体。
1.3. 核酸纯化
1.3.1 将核酸吸附柱重新装入套管，在核酸吸附柱中加入500μl洗液A，6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。
1.3.2 在核酸吸附柱中加入500μl洗液B，静置1分钟，6000g离心1分钟。
1.3.3 倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。
1.3.4 重复一次1.3.2步骤(本步骤不用静置1分钟)。
1.3.5 将核酸吸附柱换一新套管，13000rpm离心3分钟。
1.4. 核酸洗脱
1.4.1 将核酸吸附柱装入一无核酸酶1.5ml离心管，小心在吸附膜中央加入50μl预热洗脱液，室温静置4分钟。
1.4.2 10000 rpm离心2分钟，离心管中液体即待测样本RNA。
2. PCR扩增：
2.1 实验设计：
2.1.1待检样本检测：每份样本分别使用2种反应液（H7和N9反应液）进行检测，综合2种反应液的检测结果对样本进行判定。
2.1.2对照品检测：每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。
2.2反应体系的配制：
2.2.1准备工作：将2种反应液（H7和N9反应液）融化后振荡混匀，离心6000rpm 10秒。
2.2.2 2种反应体系（H7和N9）的配制：取2个1.5ml 无核酸酶离心管，计算待测样本数量(n)，分别取20μl×（n+2）反应液（H7和N9）、0.5μl×（n+2）DNA聚合酶和0.5μl×（n+2）逆转录酶充分混匀，离心6000rpm 10秒。
n + 2 = n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照；
2.3反应体系分管：
每份待测样本设置2个PCR扩增管（H7和N9），分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。
2.4加样：
每份待测样本RNA、阳性对照、阴性对照以5μl/管分别加入2个PCR扩增管中。
2.5扩增检测：
将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测，不同仪器的设置如下：
2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪（RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型）扩增程序：
对于ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光定量PCR检测仪，荧光信号设置为：Reporter Dye1：FAM、JOE/VIC，Quencher Dye1：NONE，Passive Reference：NONE。其他型号仪器可设置为FAM和HEX通道。荧光PCR扩增程序的设置见表1。反应总体积为25μl。
表1.荧光PCR扩增程序
步骤 反应温度 时间 是否采集光 循环数
逆转录及变性 50℃ 30分钟 否 1
95℃ 3分钟 否
预扩增 95℃ 15秒 否 5
50℃ 30秒 否
72℃ 1分钟 否
扩增及荧光收集 95℃ 10秒 否 40
55℃ 40秒 是
2.5.2 全自动荧光定量PCR仪（Roche LightCycler系列）扩增程序：
选择FAM、HEX通道收集荧光。荧光PCR扩增程序见表2。
表2.荧光PCR扩增程序
步骤 反应温度 时间 是否采集荧光 循环数
逆转录及变性 50℃ 30分钟 否 1
93℃ 3分钟 否
预扩增 93℃ 15秒 否 5
50℃ 30秒 否
72℃ 1分钟 否
扩增及荧光收集 93℃ 10秒 否 40
55℃ 40秒 是
3. 结果分析：
3.1本品H7荧光探针的报告荧光为FAM，N9荧光探针的报告荧光为FAM，RNP荧光探针的报告荧光为HEX。所以应选择FAM通道和HEX通道分析试验结果。
3.2 基线（Baseline）范围根据仪器要求设定，目的为校正背景荧光干扰，终止循环（End）一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。
3.3 阈值线用于判断样本是否扩增，应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号，或点击分析（Analysis）自动获得。
4. 质量控制：
每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立。
4.1阴性对照无Ct值或Ct值为0。
4.2 阳性对照Ct值小于30.0。
【参考值（参考范围）】
Ct值≤37.0报告该反应阳性；
无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；
37.0＜Ct值＜40.0为灰区；
内标RNP有效的范围为：0＜Ct值＜33.0；
【检验结果的解释】
1. 在内标RNP结果成立的条件下各种判读模式如下：
反应液 模式1 模式2 模式3 模式4
H7 - - + +
N9 - + - +
RNP + + + +
结果判断 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阳性
注：在内标RNP结果不成立的条件下视为检测异常，应重新采样检测。
2. 结果在灰区的样本需重复试验：取200μl样本重新提取RNA（核酸分离试剂盒中裂解液、无水乙醇的用量加倍，其他组分的用量不变）并检测。复检结果Ct＜40.0的样本为阳性，否则为阴性。
3. 内标RNP检测靶物质为正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA，用于对样本中RNA的提取和扩增检测过程进行有效监控。
如果该份样本的RNP检测 Ct值≥33.0，可能为以下原因：
3.1 未采集到足够的正常人上皮细胞，应重新采样。
3.2核酸提取过程异常，导致RNA损失，应重新提取。
3.3样本中存在RT-PCR抑制物质，可稀释后检测；
【检验方法的局限性】
1.样本中RNA浓度低于本产品的最低检出值（100copies/ml）时可能出现假阴性。
2.目前研究显示，发病后两日内取样检测，病毒RNA检出率最高，随发病时间的延长，病毒被清除，病毒核酸的检出水平迅速下降。因此应在发病后尽早采样，必要时可采用多部位取样检测。临床评价应结合其他临床症状和实验室检测指标进行判断。
【产品性能指标】
1.本品可最低检出100copies/ml稀释物。
2.本品对季节性流感（H1N1以及H3N2）灭活病毒、B型流感灭活病毒、高致病性禽流感灭活病毒（H5N1）RNA进行检测，结果为阴性。
【注意事项】
1.开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。
2.实验室配置和试验操作请按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》进行；整个检测过程应严格分区进行：PCR反应体系的配置区；标本处理、加样区；各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。
3.H7N9亚型禽流感为经呼吸道传播疾病，应按照相关要求进行。样本的采集、处理、运输和保存均存在一定生物危害。样本的采集、运输和保存应按照乙类传染病进行管理；标本的提取必须在生物安全二级实验室的负压生物安全柜中完成；试验中接触过标准品和对照品的废弃物品（如吸头）、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
4.不同批号的试剂请勿混用，请在有效期内使用试剂盒。
5. 本产品仅用于体外诊断检测。
【参考文献】
1. 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）
2.《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）》
3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）
【生产企业】
企业名称：北京金豪制药股份有限公司
生产地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号
注册地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号1号楼
邮政编码：100176
电话号码：010-67878866
传真号码：010-67881632
网 址：www.kinghawk828.com
【医疗器械生产企业许可证编号】京药监械生产许20050017号
H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒
（PCR-荧光探针法）说明书
【产品名称】通用名称：H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
英文名称：Detection Kit for Avian Influenza Virus Subtype H7N9 RNA (PCR-Fluorescence Probing)
【包装规格】大包装，48反应/盒
【预期用途】
流感病毒可分为甲（Ａ）、乙（Ｂ）、丙（Ｃ）三型。其中，甲型流感依据流感病毒血凝素蛋白（HA）的不同可分为1-16种亚型，根据病毒神经氨酸酶蛋白（NA）的不同可分为1-9种亚型，HA不同亚型可以与NA的不同亚型相互组合形成不同的流感病毒。而禽类特别是水禽是所有这些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一种。H7N9流感病毒既可以感染禽类，也可以感染人。人感染H7N9禽流感会出现严重肺炎，症状包括发烧、咳嗽、呼吸困难等。
本试剂盒适用于检测呼吸道样本、血清、肺组织等样本中H7N9禽流感病毒RNA，可用于该病毒感染的实验室诊断和宿主动物的监控。检测结果仅供研究，不用于临床诊断。
【检验原理】
本试剂盒基于实时荧光PCR技术，分别选取H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因保守区作为扩增靶区域，设计特异性引物探针，通过一步法实时荧光PCR体系扩增对H7N9禽流感病毒进行定性检测。反应体系中除特异性引物和特异性荧光探针外，还配以对应的PCR反应Buffer、逆转录酶、Hot-Start Taq酶、核苷酸单体（dNTPs）、Mg2+等成分，可实现对H7N9禽流感病毒核酸灵敏特异地检测。
【主要组成成分】
组分名称 规格 数量
PCR检测试剂 AIV H7 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV N9 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV H7N9 PCR反应液B 288µl/管 1
AIV H7N9内标溶液 240µl/管 1
质控品 阴性质控品 200µl/管 1
AIV H7N9阳性质控品 200µl/管 1
【储存条件及有效期】保存于-20±5℃，反复冻融次数＜5次，有效期9个月。
【适用仪器】ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480等荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1 适用样本类型：呼吸道样本、血清、肺组织。
2 样品采集、保存与运送。
标本采集、保存、运送请遵循《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》。
【检验方法】
1.核酸提取
建议取200µl液态样本进行核酸提取；组织样本可以研磨液进行提取操作。可采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒，请按照试剂盒说明书进行操作；也可选择其他合适的商业化产品。本试剂盒中的内标溶液参与提取过程，若提取试剂盒中未说明内标的使用方法可在每200µl样本中加入4µl内标溶液后进行核酸提取。
本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；AIV H7N9阳性质控品不参与提取，用于PCR检测试剂的质控。
2.PCR扩增（ABI 7500仪器操作为例，ABI 7300、LC480等仪器参照此操作及仪器操作手册）
2.1分别配制AIV H7 RT-PCR反应体系和AIV N9 RT-PCR反应体系
2.1.1 AIV H7 RT-PCR反应体系配制
取适量PCR反应管（按AIV H7反应体系计算）；每管加入AIV H7 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
2.1.2 AIV N9 RT-PCR反应体系配制
取适量PCR反应管（按AIV N9反应体系计算）；每管加入AIV N9 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
2.2 于上述PCR反应管中分别加入处理后的阴性质控品、AIV H7N9阳性质控品、待测标本核酸各5µl，8,000rpm离心数秒，放入PCR扩增仪。
2.3探针检测模式设置为：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye：NONE，Reporter Dye2：Vic，Quencher Dye2：NONE， Passive Reference：NONE。反应条件设置为：50℃ 15min，1个循环；95℃ 15分钟，1个循环；94℃ 15秒→58℃ 45秒（收集荧光），45个循环。保存文件，运行。
3.结果分析
3.1 反应结束后保存检测数据文件。
3.2 分析条件设置：根据分析后图像调节Baseline的start值、stop值以及Threshold的Value值（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面察看结果。
【质量控制】
阴性质控品：FAM检测通路扩增曲线无对数增长期，VIC检测通路扩增曲线为明显对数增长期；
阳性质控品：FAM检测通路扩增曲线有明显对数增长期，且FAM检测通道扩增曲线 Ct值≤32；
以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
【结果判定】
1.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系FAM检测通道均无扩增曲线或Ct值＞40，且在VIC检测通道均有对数增长期，可判样品为H7N9禽流感病毒阴性；
2.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系扩增曲线在FAM,VIC检测通道均有对数增长期且FAM检测通道Ct值≤40；可判样品为H7N9禽流感病毒阳性；
3.如果检测样品的AIV H7或N9 RT-PCR反应体系仅其中之一的扩增曲线满足判为阳性的要求，则需重复检测；若重复检测结果为H7及N9均阳性，则判H7N9禽流感病毒阳性；若重复检测结果仍为H7（或N9）阳性，则只能判禽流感病毒H7（或N9）亚型阳性，并建议以其他方法做进一步确认。
【检测方法的局限性】
1.样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关。
2.样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。
3.病毒在流行过程中的基因突变则也可能导致假阴性结果。
4.由于不同提取方法的原理不同，采用不同核酸提取试剂进行样本处理时核酸提取效率存在一定差异，本试剂盒推荐使用本公司生产的核酸提取试剂盒（离心柱法），用户可根据具体要求进行选择确认。
5.本检测结果仅供临床参考，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段.
【产品性能指标】
根据产品分析性能评估结果，本试剂盒的分析灵敏度为1.0×103copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（甲型流感病毒H3亚型、甲型流感病毒H1亚型、乙型流感病毒、副流感病毒、禽流感H5亚型病毒、禽流感H9亚型病毒等）无交叉反应。
【注意事项】
1.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；
2.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；
3.试剂使用前要完全解冻，8,000rpm离心数秒后使用；
4.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；
5.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外线灯处理工作台和移液器；
6.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
【生产企业】企业名称：中山大学达安基因股份有限公司
生产地址：广州市高新技术产业开发区香山路19号；广州市高新技术产业开发区荔枝山路6号
邮 编：510665
电 话：020-32290789、8008304008
传 真：020-32068820
网 址：http://www.daangene.com
【医疗器械生产企业许可证编号】粤食药监械生产许20040999号
附件2
人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求
为加强人感染H7N9禽流感病毒核酸检测规范化管理，做好实验室生物安全管理工作，根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院第424号令，以下简称《管理条例》）、《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（卫生部45号令，以下简称《管理规定》）等有关要求，制定本标准。供医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。
一、样本采集
（一）进行人感染H7N9禽流感病毒相关样本（以下简称“样本”）采集的操作人员必须经过生物安全培训合格，并具备相应的操作技能。
（二）样本采集过程中，操作人员要加强防护，应当穿戴防护服、眼罩、N95及以上水平的医用防护口罩、双层医用乳胶手套、帽子等个体防护装备。
（三）用于样本采集的主容器必须采用优质塑料材质，且大小适合、带螺旋盖、内有垫圈、无菌、耐冷冻的密闭容器。样本采集后，主容器盖必须盖严、拧紧，表面应当擦拭消毒。
（四）对诊疗过程中采集的各种临床样本，医疗机构应当加强生物安全管理，在进行动态风险沟通与评估基础上，采取样本登记造册、专库存放、专人负责以及必要的消毒处理等较严格的安全及安保管理措施。
（五）样本采集过程中产生的医疗废物要分类收集，应当在产生地点进行压力蒸汽灭菌或可靠的化学消毒，然后按感染性、损伤性等医疗废物收集处置。
二、样本包装和运输
（一）负责样本包装和运输的人员应当经过感染性物质包装、运输相关的生物安全培训，并取得相应资格。
（二）运输样本必须采取三层包装系统，由内到外分别为主容器、辅助容器和外包装。
病毒培养物按照A类感染性物质进行包装运输，其他感染性物质按照B类感染性物质进行包装运输。
容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》相应包装标准，符合防水、防破损、防外泄、耐高温、耐高压的要求。
（三）样本包装过程中，操作人员要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款的相关要求采取加强防护。
（四）操作人员应当规范包装检测样本：
1.应当在实验室核心操作区内对装有样本的主容器外表面进行仔细检查并擦拭消毒，确保无泄漏、表面无残留物，并在外表面标明样本编号、种类、姓名及采样日期等信息。用足够的吸收材料包裹主容器，然后放入辅助容器，拧紧（A类）或封严（B类）辅助容器，必要时消毒辅助容器外表面。若多个主容器装入同一个辅助容器时，必须分别包裹，防止彼此接触，并在多个主容器外面衬以足够的吸收材料。
2.应在实验室清洁区采用适当的衬垫材料将辅助容器固定在贴有统一标识的外包装箱内，冰排或制冷器件应放在辅助容器和外包装之间。样本送检单、样本接收证明、准运证书、运送人员资质证明、发送和接收人员信息等相关文件材料应当放入防水的塑料袋中，置于外包装箱内上方。
（五）样本运输前应当联系接收机构实验室，告知样本送检目的、样本种类、数量和预计送达的时间等。
（六）负责运输样本的医疗卫生机构，应当按照《管理规定》有关要求，向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心申请办理《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》。在每次运输结束后，运输单位须将运输情况向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心书面报告。
（七）包装合格的样本（三层包装系统）可通过航空或陆路运输。陆路运输应专车运输，并由2名或以上经培训合格的人员护送。运输途中样本主容器应始终保持直立，运输车辆内应携带具备清单及有效物品的应急处置箱（包），其中包括个体防护装备、感染性材料溢洒处置器具、皮肤及创口处置器具、医疗废物收集器具以及“生物危险”、“禁止通过”等警示标识。有关单位或者个人不得通过公共电（汽）车和城市铁路运输相关样本。
三、样本接收和包装开启
（一）负责样本接收与包装开启的操作人员应具备相应的操作技能，通过生物安全培训并取得相应资质。
（二）样本包装的开启应在生物安全二级及以上级别的实验室进行。样本送检单、准运证书、人员上岗证等相关文件材料的核查、登记，以及相关风险沟通/评估和开具样本接收证明等工作应在实验室清洁区内进行。
（三）包装开启过程中，操作者要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款相关要求适时加强防护。
（四）实验室操作人员应规范接收检测样本、开启包装：
1.操作人员应当在生物安全柜内开启三层包装系统的第二层辅助容器，并仔细检查主容器表面有否破损、泄漏或残留物，发现异常情况应当立即执行实验室应急处置程序，同时登记并报告实验室负责人。
2.操作者应当在生物安全柜内消毒主容器表面，核对样本信息，进行下一步的实验室检测活动，或转移至指定的保存/保藏地点及位置。
（五）包装开启和样本核查结束后，应当在实验室清洁区完成交接手续，开具样本接收证明，交还外包装和辅助容器等。实验室操作人员应对所有异常情况进行详细记录，运输和接受样本的双方人员签字确认。
四、样本分装和检测
（一）负责样本分装、检测的操作人员应当具备人感染H7N9禽流感病毒相应的实验操作能力，经过生物安全培训，并取得培训合格资质。
（二）实验室用于人感染H7N9禽流感病毒检测的设备、设施必须运行良好，生物安全柜和压力蒸汽灭菌器应当年检合格。
（三）在生物安全二级实验室从事相关实验活动时，操作人员应当配戴眼罩、N95及以上水平的医学防护口罩，穿戴防护服、双层乳胶手套等个体防护装备。
（四）实验室生物安全等级要求：
1.疑似病例未经培养的临床样本应当在生物安全二级实验室的生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
2.人感染H7N9禽流感病毒的分离培养应当在生物安全三级实验室进行。
3.动物感染实验应当在动物生物安全三级实验室进行。
（五）开展人感染H7N9禽流感病毒相关实验活动时，应当有２名以上的操作人员共同进行。
（六）实验过程中产生的医疗废物要分类收集，应在产生地点进行消毒灭菌，然后按医疗废物收集处置。
五、样本保存和销毁
（一）各医疗机构应当将阳性样本按照要求集中专库保存。
（二）阳性样本、分离物的保存及销毁应当按照《管理条例》等法规和规范性文件有关要求执行。
柳州市人民政府关于调整《柳州市基本医疗保险服务管理暂行办法》的通知
广西壮族自治区柳州市人民政府
柳州市人民政府关于调整《柳州市基本医疗保险服务管理暂行办法》的通知
各县、区人民政府，市直机关各委、办、局，各企事业单位：
为进一步完善我市医疗保险政策，加强我市医疗保险管理，更好地服务于广大参保人员，确保参保人员的基本医疗需求，决定对柳政发〔2004〕34号中的《柳州市基本医疗保险服务管理暂行办法》）进行调整，现将调整后的文件印发给你们，请遵照执行，同时原柳政发〔2004〕34号中的《柳州市基本医疗保险服务管理暂行办法》）停止执行。
二〇〇七年七月二十六日
柳州市基本医疗保险服务管理暂行办法
第一条 为加强医疗保险的服务管理工作，根据劳动和社会保障部、国家计委、财政部、卫生部等部委颁发的《城镇职工基本医疗保险用药范围管理暂行办法》、《关于城镇职工基本医疗保险诊疗项目管理的意见》和广西壮族自治区劳动和社会保障厅、广西壮族自治区卫生厅《关于加强医疗保险服务管理的通知》，结合本市实际，制定本办法。
第二条 市劳动保障行政部门负责柳州市医疗保险服务的行政管理和监督工作，市社会医疗保险管理中心（以下简称市医保中心）具体组织实施。
第三条 柳州市基本医疗保险（包括城镇职工基本医疗保险、大额医疗保险等）的参保人员适用本办法。
第四条 门诊管理
参保人员在定点医疗机构门诊就诊时，须持柳州市医保中心统一制作的医疗保险证（以下简称医疗证）和医保IC卡。接诊医师应核对医疗证、IC卡后，按广西壮族自治区医疗机构《病历书写规范手册》或国家中医药管理局编制的《中医病案规范》书写病历（书写病历时注明就诊医院）、处方及各种医疗文件，病历资料应清晰、准确、完整。
第五条 定点零售药店购药管理
参保人员到定点零售药店购买药品时，必须凭本人的医疗证和IC卡购药（已经办理代取药手续的可以由指定的代取药人购药）。处方药必须凭选定的定点医疗机构专科医师处方购买。执业药师（从业药师）应严格审核购药处方和门诊记录，认真记录购药情况(含购药时间、药店名称、诊断、药品名称、规格、数量、用法及药师签名)。购买非处方药时，由执业药师（从业药师）填写配药单，并做好购药记录。定点零售药店应将购药处方和配药单妥善保管，以备核查。
第六条 住院管理
（一）定点医疗机构应严格掌握入院标准，参保人员因病情需要住院治疗时，凭定点医疗机构诊断意见和医疗证、IC卡，办理住院手续，同时向定点医疗机构交纳住院预付金。住院预付金标准：三级医疗机构1000元，二级医疗机构800元，一级医疗机构500元。急危重症病人抢救时无法及时交纳预付金的，可先办理入院手续，在3个工作日内补齐预付金。
（二）住院期间参保人员的医疗证附在其住院病历后，住院期间参保人员不能在门诊发生医疗费。如确因病情需要到其他定点医疗机构门诊化验和检查治疗时，须凭专科医师填写的《柳州市城镇职工医疗保险住院期间使用门诊检治审批表》，到市医保中心办理住院期间使用门诊检治项目审批手续。
(三)定点医疗机构必须及时、准确、真实地向参保病人提供住院医疗费用结算清单和住院日费用清单。
(四)定点医疗机构应严格掌握出院标准，及时为符合出院条件的参保人员办理出院手续，故意拖延住院时间所增加的医疗费用市医保中心不予支付；符合出院条件的参保人员拒绝出院的，定点医疗机构自通知其出院之日起，停止医疗保险记账，按自费病人处理并及时将有关情况通知市医保中心。参保人员对出院有异议的，可向市医保中心提出，费用暂时由个人垫支。
（五）参保人员出院时，经治医师必须在医疗证上认真填写出院小结，出院结账不得预收各种检查、治疗费用。违反规定的，市医保中心拒付相关费用。
（六）定点医疗机构应严格掌握出入院标准。参保人员出院后7天内因同一种疾病再次住院治疗者，由就诊医院主治医师填写《柳州市城镇职工医疗保险参保人员再次入院审批表》，经市医保中心审核后进行IC卡处理（急危重症病人可先入院治疗并在3个工作日内补齐手续）。属医院分解住院（指同一次患病分次住院），市医保中心拒付相关费用。
第七条 家庭病床管理
家庭病床指的是将病床设在家庭的一种住院形式，定点医疗机构开设家庭病床，必须具备住院条件，在提出申请并成立家庭病床科经市医保中心批准后，方可开设。
参保人员因患急性脑血管病合并严重并发症、慢性肾功能衰竭、癌症、糖尿病胰岛素依赖型、高血压3级（极高危组）、肝硬化失代偿期并腹水、骨折治疗期活动不便的。需定期、多次到定点医疗机构进行治疗的，可以申请办理家庭病床。
办理家庭病床时，由具备开办家庭病床的定点医疗机构家庭病床科主治医师填写《柳州市城镇职工医疗保险家庭病床审批表》，经市医保中心审核，进行IC卡处理后，方可办理家庭病床入院手续。家庭病床治疗期间因病情变化需转入相应科室治疗的，按院内转科办理。
第八条 转院管理
（一）转院对象：诊疗医院经多次检查会诊、诊断仍不能明确的疑难病症患者；诊疗医院无条件继续诊治须转往专科医院者；因条件限制，本市三级医院无法检查、诊断、治疗，需要转往市外上级医院就诊者；属约定项目需转院治疗者。
对诊断明确而目前医学条件尚不能根治或有效缓解的疾病患者，不予转院。
（二）转院手续
转往市内定点医院治疗的，在结清原医院医疗费用后按重新住院办理入院手续。
凡需转往市外上级医院检查、治疗的参保人员，须由本市三级医院的专科副主任医师以上职称的医师提出申请、填写《柳州市基本医疗保险转院审批表》，经就诊医院医务科、医保办审核后，报市医保中心审批，办理转院证明。转院治疗时间一般不超过30天，特殊情况超过30天的，须凭所转医院出具的疾病证明及病情简介向市医保中心申办延期手续。
经市外上级医院检查治疗后，因病情及检查治疗条件限制需转往区外上级医院进一步检查治疗的，由转诊医院出具疾病证明及转诊意见，报市医保中心备案。
凡需转往市外医院进行约定项目治疗的，必须经市医保中心审批，办理约定项目的转院手续后，方可转院。
（三）经市医保中心批准转院的治疗期间所发生的医疗费用先由个人垫支，治疗结束后，按照转院证明上有关要求到市医保中心办理报销手续。
第九条 异地就诊管理
临时异地就诊：可在当地选择公立医疗机构就诊。
短期异地就诊：必须先到市医保中心办理短期异地就诊手续并选择当地1至3所定点医疗机构就医。
长期异地就诊：必须先到市医保中心办理长期异地就诊手续并选择当地1至3所定点医疗机构就医和1所定点零售药店购药。
办理异地就诊手续后，在生效期间，参保人员的《医疗证》、IC卡停止在本市使用。
第十条 用药管理
（一）基本医疗保险用药范围按照广西壮族自治区劳动和社会保障厅印发的《广西壮族自治区基本医疗保险和工伤保险药品目录》执行，分为“甲类药品”和“乙类药品”两类。使用“甲类药品”所发生的费用，按基本医疗保险的规定支付。使用“乙类药品”所发生的费用，由参保人员先支付一定的比例，再按基本医疗保险的规定支付。
乙类药品具体分为：
第一类：普通人群先支付10%，重病人群先支付5%；
第二类：普通人群先支付20%，重病人群先支付15%。具体包括《广西壮族自治区基本医疗保险和工伤保险药品目录》中标有“增大自付比例”、“限门诊使用并增大自付比例”和进口的药品。
《基本医疗保险和工伤保险药品目录》中，备注一栏标注了适应症的药品，是指基本医疗保险、工伤保险的参保病人，在出现符合适应症限制范围的情况下，使用该药品所发生的费用可以按规定支付。
使用自费药品（指《广西壮族自治区基本医疗保险和工伤保险药品目录》以外的药品、单味或复方均不支付费用的中药饮片和药材以及单味使用不予支付费用的中药饮片和药材，具体见附件1），基本医疗保险不予支付。
（二）定点医疗机构（含定点零售药店）要严格执行国家、自治区制定的基本用药范围和有关用药规定，合理用药。
严格遵守用药原则：每张处方以治疗1-2种疾病为主，最多不超过2种，每张处方不得超过5种药品（同类药品一般不超过2种）。门诊处方费用超过150元的须告知参保人员并确认签字。复诊过程中，药物未用完，不得提前开药或重复开药，否则市医保中心拒付相关费用。
严格掌握用药量：急诊处方一般不超过3日用量；慢性病一般不超过7日用量；对于某些慢性病、老年病或特殊情况，处方用量可适当延长，但医师必须注明理由。各种注射用药（肌注、静脉注射、静脉输液）均限3日用量，静脉输液用药一般为1—2种。
出院带药：治愈出院的限3日用量，好转出院的限7日用量，特殊情况最长不超过2周量或以最小包装单位限量，所带药品限主要诊断和与主要诊断相关的疾病用药。对超范围、超量、超金额的费用部分，市医保中心不予支付。
（三）各定点医疗机构及各定点零售药店的药品价格应严格按国家计划委员会公布的最高零售价格或柳州市政府集中招标采购的中标零售价格执行。
（四）各定点医疗机构及各定点零售药店要按照《广西壮族自治区基本医疗保险和工伤保险药品目录》中的药品名称、剂型备用和使用。基本医疗保险药品的备用率和使用率、自费药品的使用率、药品费用占医疗总费用的比例，列入定点医疗机构和定点零售药店的考核内容。
（五）各定点医疗机构和定点零售药店要严格掌握药品的适应症，临床医师应依据病情需要，按照药品法定说明书用药。对标注了适应症、限二线用药的药品应有相应的临床体征、实验室和辅助检查证据、以及相应的临床诊断依据；应有使用一线药品无效或不能耐受的依据。违反有关规定的，市医保中心拒付相关费用。
（六）使用自费药品和特殊贵重的乙类药品，必须告知参保人员并经参保人员本人或家属签字同意后方可使用。否则参保病人可拒付相关费用。
（七）在基本医疗保险支付范围内同类药品（通用名相同，商品名不同）有若干选择时，在质量相同的情况下，应选择价格低、疗效好的品种。
（八）各定点医疗机构自配制剂的，由定点医疗机构向市劳动保障行政管理部门提出申请，经市劳动保障行政管理部门组织市医保中心等相关部门和有关专家进行审核批准后，方能记账使用。未申报或未批准的医院自配制剂不允许记账使用。申报医院自配制剂时需提供如下材料：
1.药品监督管理部门《制剂许可证》；
2.制剂名、成份、质量标准；
3.药品监督管理部门核发的制剂批准文号；
4.物价部门审批的价格批文。
（九）各定点医疗机构新增药品或药品规格，须填写《基本医疗保险新增药品、检治项目及医用材料申请表》，提供药品使用说明书报市医保中心，经市医保中心审核后按基本医疗保险范围内或范围外分类添加。
第十一条 检查、治疗项目管理
（一）各定点医疗机构应严格按照卫生行政部门规定的医疗诊治技术规范进行诊治，掌握检查治疗适应症，在诊治过程中，应遵循先做一般检查治疗，后做特殊检查治疗的原则。严格执行特殊检查治疗审批制度，按照物价部门收费项目及收费标准收费。对不符合规定的检查治疗，市医保中心拒付相关费用。
（二）各定点医疗机构在治疗过程中，门诊一般只能使用一种辅助治疗，住院一般只能使用两种辅助治疗。对不符合规定的检查治疗，市医保中心拒付相关费用。
（三）特殊检查、特殊治疗（以下简称特殊检治）项目的管理。特殊检查、特殊治疗项目是指基本医疗保险支付部分费用的检查及治疗项目，分一、二两类（具体项目见附件1）。
一类特殊检治项目：普通人群个人先支付总费用的10%，再按普通人群相关支付标准支付；重病人群个人先支付总费用的5%，再按重病人群相关支付标准支付。
二类特殊检治项目：普通人群个人先支付总费用的20%，再按普通人群相关支付标准支付；重病人群个人先支付总费用的15%，再按重病人群相关支付标准支付。
因病情需要行特殊检治的，由定点医疗机构专科主治医师填写《柳州市城镇职工医疗保险乙类药品、一类特殊检治及一次性医用材料审批表》，告知参保人员或家属，经本人或家属同意签字后，报定点医疗机构医保办审批后方可使用。
定点医疗机构无该项特殊检查、治疗设备的，如确因病情需要进行特殊检查、治疗的，由就诊医院专科医师填写《柳州市城镇职工基本医疗保险住院期间使用门诊检治项目审批表》，经就诊定点医疗机构医保办审核、市医保中心审批同意，进行IC卡处理后，到提供特殊检查治疗的定点医疗机构医保办登记，方可在门诊使用IC卡记账，进行相关检查治疗。
经参保人员或家属签字同意使用的自费项目，由个人现金支付后使用，出院时结清。抢救时需使用的自费项目，可先使用，后补齐手续。
（四）定点医疗机构应加强对特殊检治项目的管理，应充分利用其他定点医疗机构的检查结果，严禁滥用大型特殊检治项目（部分特殊检查适应症见附件2），其阳性率列入考核内容。
（五）定点医疗机构为参保人员进行检查治疗时，应按物价部门规定的收费标准收费并按审批核定的项目进行检查、治疗。对擅自改变或超出审批核定项目范围和超标准收费的，以及无相应诊疗设备而收费的，其发生的医疗费用市医保中心不予支付。
（六）各定点医疗机构新增大型诊疗项目的，由定点医疗机构向市劳动保障行政管理部门提出申请（包括申请书、设备使用说明书、物价部门批准收费批文及进货发票复印件），经市劳动保障行政管理部门组织市医保中心等相关部门和有关专家进行确认后，由医保中心按基本医疗保险范围内或范围外分类添加。
第十二条 工伤和计划生育的医疗管理
机关事业单位职工的工伤和计划生育的医疗，在就诊时须凭医疗证、IC卡办理登记手续，医疗费用由用人单位或个人全额垫支，治疗结束后,属市财政全额补助和部分补助的行政事业单位的参保人员（编制内人员）到市医保中心办理报销手续；不属市财政补助的企、事业单位的参保人员按原渠道办理工伤和计划生育的医疗报销手续。
第十三条 其他医疗管理
代取药管理：参保人员本人因病（老年性痴呆、瘫痪等）不能到医院门诊就诊，需由家属代取药时，由定点医疗机构专科医师开具疾病证明，患者单位出具代取药人与患者关系证明，凭患者医疗证、IC卡及代取药人身份证件及复印件，到市医保中心办理家属代取药手续。代取药手续期限为12个月，如因病情需要延长的，须重新办理。未办理代取药手续所发生的医疗费用，市医保中心不予支付。
免指纹管理：参保人员因指纹磨损无法验证，由本人凭医疗证、IC卡到市医保中心确认后，办理免指纹手续。70岁以上的参保人员，凭本人医疗证、IC卡自愿办理免指纹手续。办理了免指纹手续的参保人员须持本人医疗证、IC卡就诊，不得由家属代取药。
免指纹急诊紧急通道：参保人员因突发急危重病，在定点医疗机构抢救治疗，不能录入指纹时，定点医疗机构经治医生在处方或检查治疗申请单上注明情况并签字，由收费人员按紧急情况进行免指纹处理。
证卡管理：参保人员在门诊就诊及购药时，不持证看病及购药、不持证卡交费、医疗证未贴照片或未盖医疗保险专用章，接诊医师可拒绝按医疗保险参保人员待遇诊治，收费人员可拒绝使用IC卡记账。
第十四条 医疗保险监督检查管理。市医保中心应配备医疗保险监督检查专管人员或招聘医疗专业技术人员，对医疗处方、特殊检查、特殊治疗、门诊和住院用药、定点零售药店购药等行为进行监督审核，对定点医疗机构是否遵守医疗保险有关规定进行日常检查和不定期检查，对查出的违规行为要按规定进行处理，相关医疗费用应当拒付，并结合服务质量考评相应扣减定点医疗机构总医疗费用，确定服务质量保证金和调剂金的拨付。
市劳动保障行政部门应当加强对各定点医疗机构和定点零售药店的医疗服务管理、医疗费用等情况进行监督管理，对二级以上各定点医疗机构（包括I类定点零售药店）的门诊就诊（购药人次）、住院人次及医疗费用等情况，可以按季度、半年、年度定期向社会公开，便于社会各界及广大参保人员进行监督。
第十五条 柳州市未成年人基本医疗保险及其他补充医疗保险的参保人员的医疗保险服务管理，以及参加医疗费用统筹管理的老红军、离休人员、二等乙级以上革命伤残军人（含伤残警察，下同）的医疗服务管理，按照本办法执行。
第十六条 老红军、离休人员、二等乙级以上革命伤残军人，在定点零售药店购买基本医疗保险范围外的自费药品，须同时持有定点医疗机构专科医师填写的《柳州市老红军、离休人员、二等乙级以上革命伤残军人普通治疗使用自费项目审批表》。
第十七条 未成年人基本医疗保险用药范围含《新增未成年人基本医疗保险用药》）的药品。
第十八条 本办法自2007年7月1日起实施。
附件：1.柳州市城镇职工基本医疗保险医疗费用支付范围
2.部分特殊检查适应症
3.重病人群确认标准
附件1：
柳州市城镇职工基本医疗保险医疗费用
支 付 范 围
一、基本医疗保险支付费用的项目范围
（一）基本医疗费用是指：国家、自治区规定的基本医疗诊疗项目和药品目录中，参保人员在定点医疗机构就医取药（含定点零售药店购药）的费用。
（二）因病情需要输血，符合规定标准的费用。
（三）经市医保中心批准异地就诊和转院检查治疗所发生的符合柳州市社会医疗保险政策规定的费用。
（四）患急危重症在非定点医疗机构急诊科（室）就近抢救的病人，因抢救所发生的符合基本医疗支付范围内的合理费用（如休克、昏迷或意识障碍、严重呼吸困难、自发性气胸、血气胸、喉梗塞及支气管严重堵塞、严重心律失常、急性心衰、呼吸衰竭、急性肾功能衰竭等急危重症）。
（五）退休人员取环作为特殊情况列入费用支付范围。
二、基本医疗保险支付部分费用的项目范围
（一）特殊检查、特殊治疗
一类特殊检治包括：χ射线计算机体层摄影装置（CT）、单光子发射电子计算机扫描装置（SPECT）、χ线机（含数字减影设备）心脏及血管造影、核磁共振成像装置（MRI）、24小时动态血压、24小时动态心电图、心电监护、ICU病房、CCU病房、体外震波碎石、纤维结肠镜、电子纤维支气管镜、高压氧仓治疗、血液透析、腹膜透析、氩离子激光治疗眼科疾病、YAG激光治疗眼科等项目；广西壮族自治区劳动保障部门规定的，经区物价部门批准的检查、治疗项目和按物价规定可单独收费的医用材料（含一次性医用材料）。
二类特殊检治包括：立体定向放射装置（γ-刀、χ-刀）、后装机内照射治疗、医疗直线加速器、放射介入治疗、氩氦刀、器官移植术（肾脏、心脏瓣膜、角膜、皮肤、血管、骨、骨髓移植）、腹腔镜、胸腔镜等腔镜监视下手术治疗、心脏起搏器、人工关节、进口人工晶体、血管支架等体内置换的人工器官及体内置放材料、心脏激光打孔等项目；广西壮族自治区劳动保障部门规定的，经区物价部门批准的价格昂贵的医疗仪器与设备的检查、治疗项目和按规定可单独收费的医用材料（含一次性医用材料）；因病情需要，使用进口人工器官或体内置换材料，以进口价格的50％，按二类特殊检治标准支付。
（二）国家和广西壮族自治区制定的基本医疗保险基本用药目录中的乙类药品。
三、基本医疗保险不予支付项目的范围
（一）服务项目类：诊疗费、挂号费、院外会诊费、病历工本费、出诊费、检查治疗加急费、点名手术附加费、优质优诊费、自请特别护士等特需医疗服务费、就（转）诊交通费、急救车费、空调费、电视费、电话费、婴儿保温箱费、食品保温箱费、微波炉费、电炉费、电冰箱费、损坏公物赔偿费、陪护费、护工费、洗理费、煎药费、膳食费、文娱活动费及其他特需生活服务费、超标准住院床位费的超出部分等。
（二）非疾病治疗项目
1.各种美容、健美项目及非功能性整容、矫正手术等；
2.各种减肥、增胖、增高项目；
3.各种健康体检；
4.各种预防、保健性的诊疗项目；
5.各种医疗咨询、医疗鉴定（精神病人司法鉴定费、劳动鉴定费、工伤病人工伤鉴定费等各种鉴定费）。
6.疾病普查普治、社会调查、疾病跟踪随访的各种费用。
（三）诊疗设备及医用材料类
1.应用正电子发射断层扫描装置（PET）、电子束CT、眼科准分子激光治疗仪等未列入支付范围的大型医疗设备进行的检查、治疗项目；
2.眼镜、义齿、义眼、义肢、助听器等康复性器具；
3.各种自用的保健、按摩、检查和治疗器械；
4.各种磁疗用品费；
5.广西壮族自治区物价部门规定不可单独收费的一次性医用材料。
（四）治疗项目类
1.各类器官或组织移植的器官源或组织源；
2.除肾脏、心脏瓣膜、角膜、皮肤、血管、骨、骨髓移植外的其他器官或组织移植；
3.近视眼矫形术；
4.气功疗法、音乐疗法、保健性的营养疗法、磁疗等辅助性治疗项目；
5.各种未经市医保中心审批的新技术、新项目的费用；
6.自找医疗单位、自请医师、自寻单方、自购药品的费用。
（五）药品类
1.不属于基本医疗保险支付的自费药品、营养滋补药品、异型包装的药品以及未批准的外购药品费用；
2.未经市劳动保障行政部门、市药品监督管理部门、市物价部门审批和市医保中心审核同意的医院自制药品费用；
3.各单位或个人用于预防服药、接种疫苗、环境卫生、防暑降温的药品费用。
（六）其他
1.各种不育（孕）症、性功能障碍的治疗项目；
2.各种科研性、临床验证性的治疗项目；
3.无医疗收费标准及超出医疗收费标准的费用；
4.未经批准，又不属于急救范围的在非定点医疗机构发生的医疗费用；
5.定点医疗机构病历无记录的费用或病历记录与实际发生的药品、检查、治疗不相符的医疗费用；
6.定点零售药店病历无购药记录的费用，或购药记录与实际发生的药品费用不相符的费用；
7.非参保人持《医疗证》、IC卡就诊的医疗费用；
8.疗养、康复治疗费用；
9.各种会议的医疗费；
10.出国和赴港、澳、台地区探亲、考查、进修、讲学期间的医疗费；
11.属违法乱纪、犯罪行为所发生的医疗费用，如吸毒、打架、斗殴等；属因个人过失应承担责任的医疗费用，如酗酒、故意自伤自残、自杀等；因交通事故所发生的医疗费用；属于其他责任人应承担的费用。
12.未经市医保中心同意转诊、转院和不符合报销规定的，超过批准转诊、转院规定时间发生的医疗费用。
13.其他按国家、自治区规定的不予报销范围的项目。
四、基本医疗保险不予支付的中药饮片及药材范围
（一）单味或复方均不支付费用的中药饮片及药材：
白糖参、朝鲜红参、玳瑁、冬虫夏草、蜂蜜、蛤蚧、狗宝、海龙、海马、红参、猴枣、琥珀、灵芝、羚羊角尖粉、鹿茸、马宝、玛瑙、牛黄、珊瑚、麝香、西红花、西洋参、血竭、燕窝、野山参、移山参、珍珠（粉）、紫河车。
各种动物脏器（鸡内金除外）和胎、鞭、尾、筋、骨。
（二）单味使用不予支付费用的中药饮片及药材：
阿胶、阿胶珠、八角茴香、白果、白芷、百合、鳖甲、鳖甲胶、薄荷、莱菔子、陈皮、赤小豆、川贝母、代代花、淡豆豉、淡竹叶、当归、党参、刀豆、丁香、榧子、佛手、茯苓、蝮蛇、甘草、高良姜、葛根、枸杞子、龟甲、龟甲胶、广藿香、何首乌、荷叶、黑芝麻、红花、胡椒、花椒、黄芥子、黄芪、火麻仁、核桃仁、胡桃仁、姜（生姜、干姜）、金钱白花蛇、金银花、橘红、菊花、菊苣、决明子、昆布、莲子、芦荟、鹿角胶、绿豆、罗汉果、龙眼肉、马齿苋、麦芽、牡蛎、南瓜子、胖大海、蒲公英、蕲蛇、芡实、青果、全蝎、肉苁蓉、肉豆蔻、肉桂、山楂、桑椹、桑叶、沙棘、砂仁、山药、生晒参、石斛、酸枣仁、天麻、甜杏仁、乌梅、乌梢蛇、鲜白茅根、鲜芦根、香薷、香橼、小茴香、薤白、饴糖、益智仁、薏苡仁、罂粟壳、余甘子、鱼腥草、玉竹、郁李仁、枣（大枣、酸枣、黑枣）、栀子、紫苏。
附件2：
部分特殊检查适应症
一、二维超声心动图检查适应症：
（一）风湿性心瓣膜病；
（二）先天性心脏病；
（三）扩张性心肌病；
（四）心肌梗塞（限于室壁瘤、乳头肌功能不全、室间隔穿孔）；
（五）高血压合并主动脉瓣反流；
（六）心外大血管畸形；
（七）心包积液；
（八）心肌病；
（九）高血压心脏病；
（十）室性心律失常（仅限于疑左心室假键索）。
二、彩色多普勒检查适应症：
（一）风湿性心瓣膜病；
（二）先天性心脏病；
（三）扩张型心肌病；
（四）心肌梗塞（限于室壁瘤、乳头肌功能不全、室间隔穿孔）；
（五）高血压合并主动脉瓣反流；
（六）心外大血管畸形。
三、动态心电图检查适应症：
（一）室上性、室性心律失常；
（二）冠心病；
（三）不明原因的晕厥。
四、动态血压检查适应症：
（一）确诊高血压，用药治疗效果不满意者；
（二）Ⅱ期以上高血压；
（三）疑“白大衣性高血压”。
五、有下列指征可进行心电监护和住入监护病房：
（一）急性心肌梗塞监护3天，有合并心律失常、休克、心泵衰者可以适当延到7天；
（二）不稳定型心绞痛监护3天；
（三）恶性室性心律失常好转后仍可监护2天；
（四）室上性心动过速转复后仍可监护6小时，快速房颤、房扑转复后仍可监护6小时；
（五）急性左心衰、Ⅲ度充血性心力衰竭、心源性休克治疗好转后仍监护24小时；
（六）冠状造影、冠状动脉扩张术（PTCA）、二尖瓣球囊扩张术（PBVP）、安装心脏永久性起搏器术后仍可监护24小时；
（七）Ⅱ°二型以上房室传导阻滞、病态窦房结综合症经治疗好转后仍可监护24小时；
（八）心肺复苏成功后仍可监护24小时；
（九）手术病人（含原有心脏疾患者）术中出现严重心律失常或并发休克者术后住入监护病房（或复苏室）并心电监护4小时。
六、CT检查适应症：
（一）需CT明确的肿瘤；
（二）恶性肿瘤的术前分期；
（三）常规检查不能明确的严重外伤（急性颅脑外伤后疑颅内损伤，严重腹部外伤疑脏器破裂）；
（四）脑血管疾病及颅内感染
急性脑出血、脑梗塞；
脑血管畸形；
常规检查不能明确的颅内感染和炎性病变；
颅内寄生虫感染及先天性颅脑畸形；
（五）脊柱感染性疾病；
（六）B超及常规检查不能明确诊断的梗阻性黄疸；
（七）骨疡性中耳炎、胆汁瘤等手术前需CT定位；
（八）确因病情需要，经专科副主任医师以上会诊，需行CT检查的。
七、磁共振检查适应症：
（一）用于肿瘤和占位性病变的手术前定位及分期
1.脑肿瘤和蛛网膜囊肿手术前定位；
2.脑脓肿需手术治疗手术前定位；
3.脑结核瘤需手术治疗手术前定位；
4.椎间盘脱出、韧带肥厚合并椎管狭窄引起脊髓压迫和神经根压迫症状手术前定位；
5.脊柱外伤椎体骨折移位压迫椎管需手术前定位；
（二）CT检查不能明确的肿瘤及局部转移和占位性病变
颅内占位性病变；
脊髓肿瘤椎管肿瘤；
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